Réamhchúraimí maidir le húsáid feadán ultra-scagacháin
(1) Roghnaigh an feadán ultrascagtha cuí. Go ginearálta, níor chóir go mbeadh an meáchan móilíneach atá le coinneáil níos mó ná 1/3 de mheáchan móilíneach an spriocphróitéin. Mar shampla, má tá meáchan móilíneach an spriocphróitéin 35kDa, is féidir an feadán ultrafiltration le meáchan móilíneach 10kDa a roghnú. Má tá meáchan móilíneach an spriocphróitéin thart ar 10kd, is féidir feadán ultrafiltration le meáchan móilíneach 3KD a úsáid. Léigh an lámhleabhar treoracha go cúramach agus tabhair aird ar chaoinfhulaingt éagsúla membrane ultrafiltration le ceimiceáin éagsúla.
(2) Tá an ultrafiltration nua-cheannaithe tirim. Cuir uisce ultrapure roimh úsáid, agus rachaidh an t-uisce go hiomlán tríd an membrane. Déan é a fhuarú i ndabhach oighir nó i gcuisneoir ar feadh cúpla nóiméad. Ansin doirt amach an t-uisce agus cuir an tuaslagán próitéine. Ní sháróidh an méid a chuirfear leis an líne bán ar bharr an fheadáin. Ba chóir go mbeadh an oibríocht éadrom. Sula gcuirtear tuaslagán próitéine leis, is gá an feadán ultrafiltration a chur isteach ar oighear le haghaidh precooling.
(3) Iarmhéid. Ba cheart mais agus lár an domhantarraingthe araon a chothromú. Tabhair faoi deara nár chóir go mbeadh an luas agus an luasghéarú ró-tapa, ar shlí eile déanfar damáiste díreach don membrane ultrafiltration. Tosaigh ultra-scagadh lártheifeacha (réamhfhuaraithe lártheifneoir go 4 céim). Tar éis an RPM de lártheifneoirí éagsúla a thiontú go G, tá sé difriúil. Coigeartaigh luasghéarú an lártheifneora chuig an bhfearas is ísle chun an brú ar an scannán a laghdú. Tabhair faoi deara go gcaithfidh tú fanacht go dtí go sroicheann an lártheifneoir an luas sprice sula bhfágann tú an lártheifneoir, ar shlí eile nuair a bhíonn fadhb leis an lártheifneoir, ní féidir leat déileáil leis an gcéad uair. Déanfar treo an scannáin agus an seafta rothlach a choigeartú de réir na dtreoracha (i gcás lártheifneoir rothlach uillinn, tá an membrane ingearach leis an seafta). In úsáid phraiticiúil, tá an luas níos ísle go ginearálta ná an lámhleabhar, rud a d'fhéadfadh saol seirbhíse an phíobáin lártheifeacha a fhadú.
(4) Nuair a bhíonn sé comhchruinnithe go dtí an 1ml atá fágtha, tóg tuaslagán maolánach 50ul agus cuir 10ul chun sreabhadh tríd féachaint an iompaíonn sé gorm, chun a mheas an bhfuil an feadán ultrafiltration ag sceitheadh próitéine. Má sceitheann an feadán, doirt an ciseal uachtarach agus sreabhadh tríd an bhfeadán nua agus tús a chur le ultrafiltration. Chun a mheas go cruinn an bhfuil an feadán ag sceitheadh, lártheifneoir le 5mgml BSA ar feadh 10min, ansin sreabhadh a ghlacadh, gliú próitéin nó Bradford a reáchtáil le haghaidh tomhas garbh, agus leanúint ar aghaidh ag cur an réiteach próitéin atá fágtha le haghaidh tiúchan (oibriú ar oighir chun an próitéin a chosc ó bheith téite) go dtí go gcuirtear na réitigh tiubhaithe go léir leis. Tabhair aird ar cibé an dtarlaíonn deascadh próitéine le linn lártheifneoirí, rud a fhágann go bhfuil bac ar phíopaí. Má tharlaíonn deascadh, cinntigh an chúis shonrach deascadh, cibé an bhfuil an tiúchan próitéin ró-ard nó an maolán míchuí; Is féidir an chéad cheann a réiteach trí ultrafiltration comhuaineach le feadáin ultrafiltration iolracha chun an tiúchan a laghdú. Is é an dara ceann ná réitigh mhaoláin éagsúla a athrú go dtí nach deascann an próitéin.
(5) Úsáidtear na céimeanna roimhe seo chun próitéin a dhíriú. Más mian leat an maolán a athrú, nuair a bhíonn an tuaslagán próitéine iomlán comhchruinnithe go dtí thart ar 1ml, cuir maolán nua go réidh (ultra-scagadh trí 0.22um membrane ultrafiltration), agus ansin díriú go dtí thart ar 1ml ar feadh trí huaire as a chéile. Braitheann méid deiridh an tiúchan deiridh ar an tiúchan próitéin riachtanach, nach bhfuil de ghnáth níos mó ná 500ul, nó is féidir é a chomhchruinniú go dtí níos lú ná 200ul. De réir an tiúchan toirte de 10 n-uaire ar a laghad gach uair, is féidir leis níos mó ná 1000 uair a bhaint amach trí huaire, rud a d'fhéadfadh cuspóir an maoláin a athrú go bunúsach a bhaint amach.
